Restrikcijas gremošana tiek veikta, inkubējot mērķa DNS molekulu ar restrikcijas enzīmiem - enzīmiem, kas atpazīst un saista specifiskas DNS sekvences un šķeļ pie konkrētiem nukleotīdiem vai nu atpazīšanas secībā, vai ārpus tās no atpazīšanas secības.
Kā sagremo restrikcijas enzīmi?
Restriction Enzyme Digest Protocol
- Pievienojiet komponentus tīrai caurulei parādītajā secībā: …
- Inkubējiet reakciju fermentācijas temperatūrā (parasti 37 °C) 1 stundu.
- Apturiet gremošanu, inaktivējot to ar karstumu (65 °C 15 minūtes) vai pievienojot 10 mM galīgās koncentrācijas EDTA.
Vai restrikcijas enzīms sagremo DNS?
Restrikcijas enzīmus var izmantot arī, lai radītu saderīgus galus PCR produktiem. … Visos gadījumos tiek izmantots viens vai vairāki restrikcijas enzīmi , lai sagremotu DNS, kas rezultējasnevirziena vai virziena ievietošanā saderīgā plazmīdā.
Kā darbojas DNS restrikcijas enzīmi?
Kā darbojas restrikcijas enzīmi? Tāpat kā visi fermenti, arī restrikcijas enzīms darbojas ar formas saskaņošanu Kad tas nonāk saskarē ar DNS sekvenci, kuras forma atbilst fermenta daļai, ko sauc par atpazīšanas vietu, tas apņem DNS un izraisa pārtraukumu abās DNS molekulas virknēs.
Kāds enzīms sagremo DNS?
Šos enzīmus sauc par restrikcijas endonukleāzēm vai restrikcijas enzīmiem, un tie spēj šķelt DNS molekulas pozīcijās, kurās atrodas noteiktas īsas bāzu sekvences.
