Lai varētu ekstrahēt pigmentus, hloroplasti tiek suspendēti izolācijas buferšķīdumā. Lai varētu iegūt pigmentus no hloroplastiem, mums vispirms ir jāatbrīvojas no bufera. Kāds ir labākais veids, kā atdalīt hloroplastus no buferšķīduma? izmantojiet centrifūgu, lai atdalītu
Kā izolēt hloroplastu?
Hloroplastu izolācijas metodē šūnas siena tiek mehāniski salauzta, izmantojot blenderi vai homogenizatoru. Pēc tam filtrējot tiek noņemti nesadalītie lapu audi un šūnu atliekas. Hloroplastus savāc, centrifugējot, izmantojot perkola gradientu.
Kā izveidot hloroplastu izolācijas buferi?
Sagatavojiet nepieciešamo 1X hloroplasta izolācijas buferšķīduma daudzumu, atšķaidot 2X buferšķīdumu 1:1 ar dH2O ūdeni Pievienojiet 10 µL 10% BSA šķīduma uz ml 1x hloroplasta. Izolācijas buferis. Tieši pirms lietošanas pievienojiet 1 µL DTT uz 1 ml hloroplasta izolācijas bufera. Iezīmējiet šo buferi kā “Pilnīgs buferis”.
Kas ir hloroplastu izolācijas buferšķīdumā?
DNS izolācijas buferis sastāvēja no 100 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl (pH 8,0), 50 mM EDTA un 1 mM DTT Hloroplastu liza tika iegūta, inkubējot hloroplastu granulu ar 8 ml DNS izolācijas bufera, 1,5 ml 20% SDS, 20 µl 2-merkaptoetanola un 30 µl proteināzes K (10 mg/ml) centrifūgas mēģenē 55°C temperatūrā 4 stundas.
Kāds ir buferšķīduma pH, ko izmanto spinātu lapu homogenizēšanai hloroplastu izolācijas protokolā?
Spināti ir piepildīti ar labiem hloroplastiem, un tie viegli izolējas. Lapas būs jāievieto aukstā blenderī ar 0,1 M fosfāta buferšķīdumu, pH 7,5 un 0,5 M saharozi, lai tās neplīst.
