Vorteksēšana neizcirps jūsu RNS, lai padarītu to nelietojamu, ja veicat nejaušas sākotnējās RT - tikai tad, ja vēlaties klonēt garu mRNS. Arī Invitrogen tehniskais atbalsts ir pareizs. Hloroforms ir smagāks par Trizol un nogrims mēģenes apakšā.
Vai ir droši virpot RNS?
Nemaisiet Trizol lizātus vai RNS paraugus, lai izvairītos no bīdes. Pēc ekstrakcijas RNS paraugus visu laiku turiet uz ledus. Šis protokols ir paredzēts paraugiem, kas lizēti 1 ml Trizol 1,5 vai 2 ml mēģenē.
Vai varat uzsildīt RNS?
Tāpēc izvairieties no augstām temperatūrām ( virs +65°C), jo tās ietekmē RNS integritāti. Tā vietā, lai izkausētu sekundārās struktūras, karsējiet RNS līdz +65°C 15 minūtes denaturējošu buferu klātbūtnē.
Kā atkārtoti suspendēt RNS granulas?
atkārtoti suspendējiet granulas ar siltu ūdeni (40-50 grādi pēc Celsija). inkubē 45 grādos celc 10 minūtes. ievietojiet tos in +4 uz 4–6 stundām.
Kā jūs izgulsnējat RNS?
A.
Pēc sāls koncentrācijas noregulēšanas RNS var izgulsnēties, pievienojot 2,5 tilpumus etanola vai 1 tilpumu izopropanola un rūpīgi samaisot, kam seko atdzesēšana vismaz 15 minūtes -20°C.
